世界上有多少氨基酸?
自然界中氨基酸的种类约有100种,其中在生物体中组成蛋白质的氨基酸约有20种,但并非生物体内每一种蛋白质都一定含有20种氨基酸。根据能否在人体内合成,氨基酸可分为必需氨基酸和非必需氨基酸。非必需氨基酸在人体细胞内能够合成(可从其他化合物转化而来)的氨基酸丙氨酸、甘氨酸等12种氨基酸。必需氨基酸不能在人体细胞内合成,必需从外界环境中直接摄取赖氨酸、苯丙氨酸等8种氨基酸(婴儿有9种,比成人多的一种是组氨酸)。
氨基酸怎么检测?
1、双指示剂甲醛滴定法(测定游离氨基酸)
有单指示剂滴定法、双指示剂滴定法。
单指示剂有:百里酚酞,酚酞。双指示剂有:中性红—百里酚酞。
其原理均是用甲醛与NH2作用,使碱性消失,再用强碱滴定COOH。
测定:①样品(溶液)(20—30mg氨基酸+H2O+3滴中性红,用0.1N NaOH滴定至黄橙色 (V1)②样品+中性甲醛+3滴百里酚酞,摇,静1min,用0.1N NaOH滴定至淡蓝色 (V2)。
计算: 氨基酸态氮(%)= [(V2-V1)×C×0.014]/W*100
式中:V1——用中性红作指示剂滴定时消耗氢氧化钠的体积,V2——用百里酚酞作指示剂滴定时耗氢氧化钠的体积。
2、电位滴定法
(1)原理:加入甲醛,固定氨基碱性。用酸度计指示滴定终点,据加入甲醛后耗用NaOH量计算蛋白质%。
适用于混浊及色深样品的直接滴定。
(2)测定:①样液用NaOH滴定至pH=7.5~8.2。
②加入中性20%甲醛后,用NaOH滴至pH=9.2。
③同时作空白试验。
(3)计算:
3、茚三酮比色法
(1)原理
氨基酸在碱性溶液中能与茚三酮作用生成蓝紫色化合物,λmax=570nm其颜色深浅与氨基酸含量成正比。
(2)测定
①准确吸取100μg/ml氨基酸标准溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml至比色管中,补加水至相同体积。加入茚三酮、磷酸缓冲液各1ml,水浴中加热15min。加水至(或转入容量瓶中)25ml,静置15min。在570nm下以空白液为参比液,测A,绘制标准曲线。
②样品测定
吸取样液1~5ml,用同样条件下测A,查出氨基酸μg。